A contaminação de culturas de células pode facilmente se tornar o problema mais comum em laboratórios de cultura de células, às vezes causando consequências muito graves.Os contaminantes da cultura de células podem ser divididos em duas categorias, contaminantes químicos, como meio, impurezas de soro e água, endotoxinas, plastificantes e detergentes e contaminantes biológicos, como bactérias, fungos, leveduras, vírus, infecção cruzada por micoplasmas.Contaminado por outras linhas celulares.Embora seja impossível eliminar completamente a contaminação, sua frequência e gravidade podem ser reduzidas com o conhecimento completo de sua fonte e seguindo boas técnicas assépticas
1. Esta seção descreve os principais tipos de contaminação biológica:
Contaminação bacteriana
Contaminação por fungos e vírus
Contaminação por micoplasma
contaminação por levedura
1.1 Contaminação bacteriana
As bactérias são um grande grupo de microorganismos unicelulares ubíquos.Eles geralmente têm apenas alguns mícrons de diâmetro e podem ter uma variedade de formas, de esferas a hastes e espirais.Devido à sua ubiquidade, tamanho e taxa de crescimento rápido, as bactérias, juntamente com as leveduras e bolores, são os contaminantes biológicos mais comuns na cultura de células.
1.1.1 Detecção de Contaminação Bacteriana
A contaminação bacteriana é facilmente detectada pela inspeção visual da cultura poucos dias após a infecção;
Culturas infectadas geralmente aparecem turvas (isto é, turvas), às vezes com uma película fina na superfície.
Quedas repentinas no pH do meio de cultura também são freqüentemente encontradas.
Sob um microscópio de baixa potência, as bactérias aparecem como minúsculos grânulos em movimento entre as células, e a observação sob um microscópio de alta potência pode resolver as formas de bactérias individuais.
1.2 Contaminação por fungos e vírus
1.2.1 Contaminação por Mofo
Os bolores são microrganismos eucarióticos do reino fúngico que crescem na forma de filamentos multicelulares chamados hifas.As redes conectivas desses filamentos multicelulares contêm núcleos geneticamente idênticos chamados colônias ou micélio.
Semelhante à contaminação por leveduras, o pH da cultura permanece estável durante a fase inicial da contaminação e então aumenta rapidamente à medida que a cultura se torna mais severamente infectada e torna-se turva.Sob o microscópio, o micélio é geralmente filamentoso, às vezes como aglomerados densos de esporos.Os esporos de muitos fungos podem sobreviver em ambientes extremamente hostis e inóspitos durante sua fase de dormência e são ativados somente quando as condições corretas de crescimento são encontradas.
1.2.2 Contaminação por Vírus
Os vírus são agentes infecciosos microscópicos que assumem o maquinário da célula hospedeira para reprodução.Seu tamanho extremamente pequeno os torna difíceis de serem detectados em cultura e removidos de reagentes usados em laboratórios de cultura de células.Como a maioria dos vírus tem requisitos muito rígidos para seus hospedeiros, eles geralmente não afetam adversamente as culturas de células de outras espécies além do hospedeiro.
No entanto, o uso de culturas de células infectadas por vírus pode representar um sério risco para a saúde do pessoal do laboratório, especialmente se células humanas ou de primatas forem cultivadas em laboratório.
A infecção viral em culturas de células pode ser detectada por microscopia eletrônica, imunocoloração com um conjunto de anticorpos, ELISA ou PCR com iniciadores virais apropriados.
1.3 Contaminação por Mycoplasma
Os micoplasmas são bactérias simples sem paredes celulares e são considerados os menores organismos auto-replicantes.Devido ao seu tamanho extremamente pequeno (geralmente menos de 1 mícron), o micoplasma é difícil de detectar até atingir densidades extremamente altas e causar a deterioração das culturas de células;Até então, geralmente não há sinal óbvio de infecção.
1.3.1 Detecção de contaminação por micoplasma
Alguns micoplasmas de crescimento lento podem persistir em culturas sem causar morte celular, mas alteram o comportamento e o metabolismo das células hospedeiras em culturas.
A infecção crônica por micoplasma pode ser caracterizada por taxa de proliferação celular reduzida, densidade de saturação diminuída e aglutinação em cultura em suspensão.
No entanto, a única maneira confiável de detectar a contaminação por micoplasma é testar a cultura regularmente usando coloração fluorescente (por exemplo, Hoechst 33258), ELISA, PCR, imunocoloração, autorradiografia ou teste microbiano.
1.4 Contaminação por levedura
As leveduras são eucariotos unicelulares do reino dos fungos, variando em tamanho de alguns mícrons (geralmente) a 40 mícrons (raramente).
1.4.1 Detecção de contaminação por levedura
Assim como na contaminação bacteriana, as culturas contaminadas com leveduras podem ficar turvas, principalmente se a contaminação estiver em estágio avançado.O pH de culturas contaminadas com levedura muda muito pouco até que a contaminação se torne mais severa, estágio em que o pH geralmente aumenta.Sob o microscópio, a levedura aparece como partículas ovóides ou esféricas individuais e pode produzir partículas menores.
2.Infecção cruzada
Embora não seja tão comum quanto a contaminação microbiana, a extensa contaminação cruzada de muitas linhas celulares com HeLa e outras linhas celulares de crescimento rápido é um problema claramente definido com sérias consequências.Obtenha linhas celulares de bancos de células respeitáveis, verifique regularmente as características das linhas celulares e use boas técnicas assépticas.Essas práticas o ajudarão a evitar a contaminação cruzada.Impressão digital de DNA, cariótipo e isotipagem podem confirmar se há contaminação cruzada em sua cultura de células.
Embora não seja tão comum quanto a contaminação microbiana, a extensa contaminação cruzada de muitas linhas celulares com HeLa e outras linhas celulares de crescimento rápido é um problema claramente definido com sérias consequências.Obtenha linhas celulares de bancos de células respeitáveis, verifique regularmente as características das linhas celulares e use boas técnicas assépticas.Essas práticas o ajudarão a evitar a contaminação cruzada.Impressão digital de DNA, cariótipo e isotipagem podem confirmar se há contaminação cruzada em sua cultura de células.
Horário de postagem: 01 de fevereiro de 2023